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無血清細(xì)胞凍存液的制備方法是什么?

更新時間:2023-05-16   點擊次數(shù):1538次
  無血清細(xì)胞凍存液是一種常用的細(xì)胞保存方法,適用于多種類型的細(xì)胞,并且可以長期保存在低溫條件下。
 
  無血清細(xì)胞凍存液的制備步驟:
 
  1.準(zhǔn)備培養(yǎng)基
 
  最好使用不含血清的培養(yǎng)基,以減少凍存液中可能存在的血清對細(xì)胞存活性的影響。使用無血清培養(yǎng)基時需要注意,必須添加適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)物質(zhì)和生長因子來維持細(xì)胞的生長和代謝。
 
  2.細(xì)胞檢測
 
  檢查所需保存的細(xì)胞是否符合要求,如細(xì)胞的外觀、生長狀態(tài)、染色體數(shù)目等。如果細(xì)胞有任何異常,就需要進行處理或舍棄。
 
  3.細(xì)胞收集
 
  將細(xì)胞從培養(yǎng)皿中收集,可以通過倒置培養(yǎng)皿、利用細(xì)胞刮片或使用細(xì)胞收割機來完成。在收集細(xì)胞時需要注意避免損傷細(xì)胞膜。
 
  4.細(xì)胞計數(shù)
 
  使用細(xì)胞計數(shù)器或顯微鏡計數(shù)室對細(xì)胞數(shù)量進行計數(shù)。確保細(xì)胞密度適當(dāng),通常建議細(xì)胞密度在200,000-500,000個/ml。
 
  5.細(xì)胞離心
 
  將細(xì)胞離心,去除培養(yǎng)基,并用一些無菌的生理鹽水或磷酸緩沖液洗滌細(xì)胞,以去除殘留培養(yǎng)基和細(xì)胞碎片。
 
  6.細(xì)胞懸液制備
 
  加入適量的凍存液(通常為含10%甘油和90%培養(yǎng)基的混合物)到細(xì)胞懸液中?;靹蚝蠓盅b到無菌凍存管中,每支管放入1-2ml的細(xì)胞懸液。
 
  7.細(xì)胞冷凍
 
  將分裝好的細(xì)胞懸液放置于冰鹽混合物(-80℃)中快速冷凍,避免出現(xiàn)晶體形成。在冷凍過程中應(yīng)該盡可能地減少對細(xì)胞的損傷。
 
  8.細(xì)胞儲存
 
  將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中進行長期保存,避免溫度波動和污染。每次需要使用時,應(yīng)該迅速將凍存管從液氮罐中取出并進行解凍處理。
 
  總之,制備無血清細(xì)胞凍存液需要嚴(yán)格控制細(xì)胞密度、培養(yǎng)基組分和處理過程中的溫度等多個因素,以確保細(xì)胞能夠正常存活并長期保存。

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